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Corsa elettroforetica per SDS-PAGE e trasferimento su nitrocellulosa per Western blotting

Procedimento:
Corsa su poliacrilammide per la comparazione dell'estratto grezzo e della proteina purificata in una SDS PAGE e Western blotting.

Note, risultati e conclusioni:
La proteina purificata presenterà probabilmente degli agenti inquinanti, e si procederà quindi con una SDS-PAGE. Con questa tecnica si ha una separazione in funzione del peso molecolare della proteina, sfruttando la migrazione di questa all'interno di un gel di poliacrilammide sottoposto ad un campo elettrico.
In particolar modo abbiamo utilizzato un gel di tipo discontinuo, formato cioè da due porzioni:
- STACKING GEL ? che permette di concentrare le proteina in una stretta banda;
- RESOLVING GEL ? che permette la separazione delle diverse specie proteiche, in singole
Bande.

Al termine della corsa elettroforetica, avremo la colorazione di uno dei due gel con COOMASSIE BLU, colorante che si fissa sulla stragrande maggioranza delle proteine.

Il secondo gel verrà utilizzato per il trasferimento su nitrocellulosa, trasferimento che avviene sfruttando un campo elettrico disposto perpendicolarmente rispetto al gel.