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Analisi risultati e preparazione minicolture

Procedimento:
Osservazione dei risultati dell'esperimento di trasformazione, analisi dell'effetto della fosfatasi alcalina e calcolo dell'efficienza di trasformazione. Scelta e crescita in terreno liquido o/n di una colonia di cellule trasformate con il plasmide più l'inserto.

Note, risultati e conclusioni:
Come aspettato nella piastra in cui non era stato messo DNA non si è osservata alcuna crescita, essendo il terreno contenente ampicillina ed il gene per la resistenza all'antibiotico sul plasmide. Nella piastra con il plasmide chiuso i frammenti alfa, sul plasmide, e omega, sul menoma batterico, hanno permesso di ottenere una beta galattosidasi funzionante la quale, reagendo con l'X-gal ha reso le colonie colorate di blu. La sintesi della beta galattosidasi è permessa dall'induttore dell'operone LAC IPTG messo nel terreno. In particolare l'induttore si lega al repressore dell'operone, rendendo così la produzione di beta galattosidasi costitutivamente espressa.
Nella piastra contenente il prodotto della ligazione dal vettore linearizzato si osserva una mediocre crescita. In questo modo possiamo testare l'enzima ligasi usato.
Poiché la fosfatasi alcalina non è efficiente al 100% si osserva la presenza di cloni anche nella piastra il cui prodotto di ligazione era stato il vettore defosforilato e linearizzato.
Nella piastra in cui non vi erano state messe le cellule trasformate con il prodotto di ligazione tra il vettore defosforilato ed il frammento si osserva la presenza di colonie bianche, in quanto il frammento rende la beta galattosidasi inattiva.