-7°/8° giorno-
Analisi di restrizione dei plasmidi ricombinanti

Procedimento:
Analisi dei siti di restrizione del plasmide con XbaI, BamHI, SphI, HindII, HindII+BamHI. Costruzione della mappa di restrizione del plasmide

Note, risultati e conclusioni:
Nel settimo giorno osserviamo la corsa elettroforetica preparata con i campioni ottenuti nell'esperienza precedente. Si può osservare come siano presenti delle diverse isoforme del plasmide nei primi due campioni, e come il plasmide senza inserto, nel terzo pozzetto, sia corso di più , a testimonianza del suo peso minore.
Gli enzimi scelti per effettuare la mappa di restrizione del plasmide, non è ovviamente casuale.
Conoscendo la mappa del plasmide, vediamo come il sito XbaI, è presente una volta sola, ed è stato usato anche per l'inserimento dal plasmide. Da cui se ne deduce che nella corsa elettroforetica che seguirà, otterremo due frammenti, uno grande quanto il plasmide, uno quanto l'inserto.
Con il sito BamHI otteniamo un frammento solo, sito presente sul plasmide, che ci indica la lunghezza del plasmide più l'inserto.
Con SphI si osservano due frammenti. Uno presente sul plasmide, l'altro evidentemente sull'inserto.
HindII ci permette di osservare una banda unica, ma il suo sito non è presente nel plasmide, deve quindi esserci un sito di restrizione sull'inserto.
Il taglio effettuato con HindII e BamHI ci indica invece la distanza presente tra i due siti di restrizione, essendo presenti entrambi una volta sola sul plasmide, uno sull'inserto l'altro sulla porzione del plasmide originale, rispettivamente.