-3° Giorno-
Preparazione di cellule competenti con CaCl2

Procedimento:
Determinazione attraverso metodi spettrofotometrici della fase di crescita di una coltura di E. coli. Individuata la fase esponenziale si procede al trattamento con CaCl2 per rendere le cellule competenti.

Note, risultati e conclusioni:
Effettuiamo una serie di misure spettrofotometriche per determinare quando le cellule di E. coli sono in fase esponenziale, momento devono essere trattati con il cloruro di calcio.

Come si può vedere dal grafico (su scala logaritmica) si ottiene una linea retta, a dimostrazione che siamo appunto nella fase esponenziale.

Il cloruro di calcio, agisce da chelante, in questo modo le cariche del DNA vengono schermate e possono entrare attraverso microfratture a livello di membrana a causa della sua cristallizzazione per la bassa temperatura a cui avviene il trattamento. E' da notare che normalmente il DNA entrato sarebbe aggredito da enzimi di restrizioni del batterio posti a difesa proprio da DNA esogeno. Tuttavia i batteri da noi usati, appartengono ad un ceppo geneticamente modificato, per evitare simili problematiche.