-6° giorno-
Estrazione plasmidica dai cloni ricombinanti

Procedimento:
Estrazione plasmidica delle cellule fatte crescere il giorno prima.

Note, risultati e conclusioni:
Nei passaggi effettuati per l'estrazione plasmidica, possiamo osservare il significato dei vari passaggi.
Nel primo tampone usato del kit Miniprep QIAGEN, si osserva la presenza di RNasi che permette la digestione di tutti gli RNA presenti nelle cellule, siano transfert, messaggeri, o ribosomali.
Nella soluzione successiva per la presenza di NaOH abbiamo una denaturazione del DNA per il pH alcalino e la presenza di SDS che permette di distruggere le membrane.
L'ultimo tampone usato serve per far rinaturare il DNA, ma se quello plasmidica si associa in modo corretto, quello cromosomale, essendo di dimensioni maggiori, si ingarbuglia, potendo quindi distinguersi dal DNA plasmidica che rimane in soluzione.
La microcolonna QIA-Prep contiene un gel che è costituito da sferette inerti alle quali sono state legate delle sostanze (DAE) carico positivamente, il quale reagendo con le cariche negative dei plasmidi (dati dai fosfati), li trattengono.

A sinistra il ladder, successivamente le corse di un estrazione plasmidica provenienti da colonie bianche (e quindi con inserto), e l'ultima un estrazione plasmidica proveniente da una colonia blu (senza inserto). Si notino le diverse bande corrispondenti alle diverse forme di superavvolgimento dei plasmidi.