-13° giorno-
Purificazione di una proteina ricombinante da estratto di E. coli

Procedimento:
A partire da un estratto grezzo, purificazione, attraverso una colonna cromatografia per affinità, di una proteina ricombinante.

Note, risultati e conclusioni:
La proteina che vogliamo estrarre è la TgFNR ricombinante (aggiunta di una coda di 6 istidine).
La TgFNR fa parte della famiglia delle ossido riduttasi, e in particolare è una ferredossina NADP+ dipendente di Toxoplasma Gondii. Questa proteina è coniugata con un gruppo prostetico FAD, che le conferisce un colore giallo.
La coda di polistidina aggiunta alla proteina, permette la sua separazione attraverso una procedura di affinità. Gli ioni presenti in soluzione (Nichel Ni++), formano dei legami di coordinazione con gli anelli imidazolici delle istidine della proteina ricombinante e con i residui della matrice.

Una volta effettuata la separazione, la proteina viene eluita con una soluzione contenente elevate concentrazioni di imidazolo, il quale competerà con la proteina per il legame con la matrice.