-11° giorno-
Isolamento di DNA cromosomale da lievito

Procedimento:
Estrazione del cromosoma circolare di lievito (S. cerevisiae )in un ceppo geneticamente modificato.

Note, risultati e conclusioni:
Con questa esperienza vogliamo sperimentare l'estrazione di DNA cromosomale e analizzare la mutazione genetica introdotta nel mutante.
Per l'estrazione cromosomale, abbiamo utilizzato un primo tampone contenente: SORBITOLO (per creare ambiente ipertonico), EDTA (che sequestra gli ioni presenti, evitando l'utilizzo di questi da parte della Dnasi), ß-MERCAPTOETANOLO, ZIMOLIASI (enzima che idrolizza la parete cellulare, causando così la formazione di sferoplasti

Effettuiamo due misure spettrofotometriche, per osservare il cambiamento di assorbanza dovuto all'azione del tampone.

Il tampone successivo, per la presenza di SDS, serve per rompere gli sferoplasti .
L'innalzamento successivo della temperatura, causa la denaturazione delle proteine, che grazie all'aggiunta di acetato di potassio, precipitano.
Una volta prelevato il surnatante, l'isopropanolo permette la precipitazione del DNA; mentre l'aggiunta di un terzo tampone contenente Rnasi, permette di idrolizzare l'RNA.

Effettuiamo una elettroforesi dell'estrazione cromosomica. L'ordine di caricamento è: a sinistra il wilde type, a destra (dei selezionati) il mutante. Come si vede la banda del mutante non è presente. Mancanza imputabile probabilmente ad errori sperimentali.