polimerasi

 

Descrizione della tecnica PCR 
(reazione a catena della polimerasi:polymerase chain reaction)

1-permette di ottenere in breve tempo(ore,giorni) grandi quantitą
  di duplicati di frammenti di DNA utilizzando poche copie iniziali
2-materiale necessario:
  -frammento di DNA da duplicare (stampo,template:circa 2000 nucleotidi)
  -sequenze di nucleotidi complementari delle zone adiacenti alle
   estremitą del DNA da duplicare (inneschi o primers:circa 20 nucleotidi)
  -nucleotidi per la sintesi della catena di DNA
  -enzima DNA polimerasi per la sintesi delle catene di DNA
3-fasi operative:
  -separazione delle due catene del DNA mediante riscaldamento
   per circa 1 minuto a 95°C
  -aggiunta degli inneschi o primers e loro unione alle sequenze
   complementari nel DNA alla temperatura di circa 60°C per 1 minuto
  -aggiunta dell'enzima DNA polimerasi e dei nucleotidi alla temperatura
   di circa 72°C per tempo variabile in funzione della lunghezza del
   DNA da sintetizzare:si formano due catene di DNA simile alla iniziale
  -si ripetono le fasi precedenti sulle catene ottenute,ottenendo la
   sintesi di altre due catene:totale quattro
  -si ripetono le fasi precedenti pił volte ottenendo cosi' un numero
   rapidamente crescente di DNA duplicati

nota:mescolando catene semplici di nucleotidi con DNA polimerasi e
     nucleotidi,non si realizza la sintesi delle nuove catene:questa
     viene invece facilitata dalla presenza di porzioni di doppia
     catena ottenute con la unione dei primers alle estremitą delle
     catene che servono come stampo.

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