polimerasi
Descrizione della tecnica PCR
(reazione a catena della polimerasi:polymerase chain reaction)
1-permette di ottenere in breve tempo(ore,giorni) grandi quantitą
di duplicati di frammenti di DNA utilizzando poche copie iniziali
2-materiale necessario:
-frammento di DNA da duplicare (stampo,template:circa 2000 nucleotidi)
-sequenze di nucleotidi complementari delle zone adiacenti alle
estremitą del DNA da duplicare (inneschi o primers:circa 20 nucleotidi)
-nucleotidi per la sintesi della catena di DNA
-enzima DNA polimerasi per la sintesi delle catene di DNA
3-fasi operative:
-separazione delle due catene del DNA mediante riscaldamento
per circa 1 minuto a 95°C
-aggiunta degli inneschi o primers e loro unione alle sequenze
complementari nel DNA alla temperatura di circa 60°C per 1 minuto
-aggiunta dell'enzima DNA polimerasi e dei nucleotidi alla temperatura
di circa 72°C per tempo variabile in funzione della lunghezza del
DNA da sintetizzare:si formano due catene di DNA simile alla iniziale
-si ripetono le fasi precedenti sulle catene ottenute,ottenendo la
sintesi di altre due catene:totale quattro
-si ripetono le fasi precedenti pił volte ottenendo cosi' un numero
rapidamente crescente di DNA duplicati
nota:mescolando catene semplici di nucleotidi con DNA polimerasi e
nucleotidi,non si realizza la sintesi delle nuove catene:questa
viene invece facilitata dalla presenza di porzioni di doppia
catena ottenute con la unione dei primers alle estremitą delle
catene che servono come stampo.