polimerasi
Descrizione della tecnica PCR (reazione a catena della polimerasi:polymerase chain reaction) 1-permette di ottenere in breve tempo(ore,giorni) grandi quantitą di duplicati di frammenti di DNA utilizzando poche copie iniziali 2-materiale necessario: -frammento di DNA da duplicare (stampo,template:circa 2000 nucleotidi) -sequenze di nucleotidi complementari delle zone adiacenti alle estremitą del DNA da duplicare (inneschi o primers:circa 20 nucleotidi) -nucleotidi per la sintesi della catena di DNA -enzima DNA polimerasi per la sintesi delle catene di DNA 3-fasi operative: -separazione delle due catene del DNA mediante riscaldamento per circa 1 minuto a 95°C -aggiunta degli inneschi o primers e loro unione alle sequenze complementari nel DNA alla temperatura di circa 60°C per 1 minuto -aggiunta dell'enzima DNA polimerasi e dei nucleotidi alla temperatura di circa 72°C per tempo variabile in funzione della lunghezza del DNA da sintetizzare:si formano due catene di DNA simile alla iniziale -si ripetono le fasi precedenti sulle catene ottenute,ottenendo la sintesi di altre due catene:totale quattro -si ripetono le fasi precedenti pił volte ottenendo cosi' un numero rapidamente crescente di DNA duplicati nota:mescolando catene semplici di nucleotidi con DNA polimerasi e nucleotidi,non si realizza la sintesi delle nuove catene:questa viene invece facilitata dalla presenza di porzioni di doppia catena ottenute con la unione dei primers alle estremitą delle catene che servono come stampo.